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https://www.innovacioneducativa.unam.mx:8443/jspui/handle/123456789/7131| Título : | Uso de células madre mesenquimales de la pulpa dental humana (hDPSC): Manual de prácticas para mejorar la enseñanza de Biología Molecular, Celular y Tisular |
| Autor : | GARCIA CONTRERAS, RENE |
| Fecha de publicación : | 2018 |
| Resumen : | Previamente con la implementación de un manual que detalla la enseñanza práctica del aislamiento, cultivo y caracterización de células madre mesenquimales de la pulpa dental (hDPSC) (PAPIME 2017: PE201617) se logró estandarizar el método y establecer cultivos primarios que contribuyen significativamente al aprendizaje de los alumnos. Bajo es este mismo sentido, es esencial dar continuidad a este gran esfuerzo con la implementación de un manual prácticas in vitro para mejorar la enseñanza de biología molecular, celular y tisular con la utilización de hDPSC. Mismas prácticas de laboratorio que contribuirán al aprendizaje con la realización de aislamiento y cultivo primario, subcultivos, identificación morfológica celular y organelos, interacción de las células con su ambiente, identificación de la respiración aeróbica, evaluación de la fragmentación del DNA y tipo de muerte celular. El uso de las hPDSC ha dado pauta para la creación de terapias regenerativas y múltiples aplicaciones en ingeniería tisular por su capacidad de autorenovarse, ser pluripotentes, presentar morfología fibroblastoide y plasticidad hacia diversos linajes celulares como condrocitos, osteocitos y adipocitos, entre otros. Las practicas de laboratorio propuesta ayudarán a los estudiantes de pregrado y posgrado a encontrar una conexión tangible entre la teoría y la práctica de la asignatura de Biología Molecular, Celular y Tisular, Inmunología e Histología, Embriología y Procesos Bioquímicos Relacionados, para los alumnos de las licenciaturas de Odontología, Ciencias Agrogenómicas y de las asignaturas de posgrado: Inmunología, Biología celular I y II; y Biología molecular I y II, Células troncales, Biología del periodonto y Tejido Pulpar, entre otras; que repercutirá de manera favorable en su aprendizaje durante sus estudios de licenciatura y posgrado con la implementación y uso del manual propuesto. |
| URI : | http://132.248.161.133:8080/jspui/handle/123456789/7131 |
| metadata.dc.contributor.responsible: | GARCIA CONTRERAS, RENE |
| metadata.dc.coverage.temporal: | 2018-2019 |
| metadata.dc.description.objective: | • Diseñar un manual de prácticas con el uso de hDPSC como parte de la enseñanza-aprendizaje de las asignatura Biología Celular, Molecular y Tisular y que contribuya a las asignaturas de Inmunología; e Histología, Embriología y Procesos Bioquímicos relacionados, para los alumnos de las Licenciaturas de Odontología, Fisioterápia, Ciencias Agrogenómicas, Optometría y de las asignaturas: Inmunología, Biología celular I y II; y Biología molecular I y II, Células troncales, Biología del periodonto y tejido pulpar, entre otras; de los programas de posgrado de Especialidad, Maestría y Doctorado en Biomateriales, Patología Bucal y Cirugía Oral y Maxilofacial. |
| metadata.dc.description.hypothesis: | La implementación del manual de prácticas con el uso de células pulpares mesenquimales de la pulpa dental humana (hDPSC) contribuirá a potencializar el desarrollo de competencias en el proceso de enseñanza-aprendizaje como parte de las actividades prácticas en el estudio de la Biología Molecular, Celular y Tisular con protocolos estandarizados y reproducibles que contribuyan a la motivación al desarrollo de la investigación y un mayor criterio científico en la Escuela Nacional de Estudios Superiores (ENES) Unidad León de la UNAM. Donde se ofertan las licenciaturas en Ciencias Agrogenómicas, Fisioterapia, Odontología, y Optometría; posgrados en especialidades en Ortodoncia, Odontología Pediátrica, Patología Oral, Biomateriales Dentales, Cirugía Oral y Maxilofacial así como el Programa de Maestría y Doctorado en ciencias Médicas, Odontológicas y de la Salud. Programas que conllevan a una alta práctica y enseñanza científica en actividades de laboratorio, siendo los resultados esenciales para el desarrollo de su aprendizaje y formación durante la licenciatura y posgrado. Dentro de la Licenciatura en Odontología y los programas de posgrado, el aprendizaje de ciencias básicas como lo son la bioquímica, biología celular, molecular y tisular es esencial para el desarrollo de un mejor aprendizaje y formación de alumnos con un alto criterio científico. |
| metadata.dc.description.strategies: | La estrategia metodológica de la implementación de la enseñanza práctica del uso de células madre mesenquimales de la pulpa dental humana (hDPSC): manual prácticas para mejorar la enseñanza de Biología Molecular, Celular y Tisular corresponderá de la siguiente manera: 1. Práctica 1: Cultivo celular primario. Objetivo: Aislar y cultivar células madre mesenquimales de la pulpa dental humana (hDPSC) obtenidas de biopsias de pacientes. Materiales y métodos: Se utilizarán terceros molares de pacientes con un intervalo de edad de 16-25 años de edad. Los molares se lavarán con buffer de PBS. Se realizará un corte a baja velocidad e irrigación con PBS con discos de carburo a lo largo de la línea cervical sin alcanzar el límite de la cámara pulpar, la separación final de la raíz se realizará con una espátula. La totalidad del tejido pulpar se colocará sobre un porta-objetos de vidrio estéril y se realizarán explantes de 0.5x0.5 mm. El tejido será inoculado en platos de cultivo de 10 cm y cultivados con medio de cultivo DMEM suplementado con el 20% de suero fetal bovino (FBS), glutamina y antibiótico. Las muestras se incubarán a 37 °C con el 5% de CO2 y 95% de humedad durante 21 días y cuando muestren un fenotipo fibroblastoide y una confluencia celular del 80% se realizará un subcultivo. 2.Práctica 2: Subcultivo celular o cultivo secundario. Objetivo: Identificar el porcentaje de proliferación celular del cultivo primario y ejecutar un cultivo secundario. Materiales y métodos. Los subcultivos se realizarán al desprender las hDPSC del plato de cultivo con tripsina. Los subcultivos se realizarán a una densidad de 1:3. 3.Práctica 3: Observación celular. Objetivo: Identificar las diferentes estructuras y organelos de hDPSC con microscopía de contraste de fases. Material y métodos: el subcultivo realizado se dejara incubar durante 48 horas. La visualización de la morfología, estructura y organelos celulares se realizara bajo un microscopio de contraste de fases y tomarán microfotografías para su analizar. 4.Práctica 4: Interacción de las hDPSC y su ambiente. Objetivo: Evaluar la interacción de hDPSC celular con una superficie de titanio (Ti). Material y métodos: Se prepararán muestras de Ti puro de 10x10x0.5mm que serán pulidas y esterilizadas. Se inocularán hDPSC sobre las placas por una hora y las células adheridas interactuando con las muestras se visualizará con microscopia de fluorescencia con el previo tratamiento de azul de alcian (Cuellar-Flores et.al., 2016; García-Contreras et al., 2011; Garcia-Contreras, 2010; Meza-Rodríguez et. al., 2016; Ornelas-Ponce et.al., 2016). 5. Práctica 5: Respiración aeróbica. Objetivo: Conocer el efecto citotóxico de componentes de uso dental mediante la detección de la respiración aeróbica con ensayos de viabilidad celular de MTT. Materiales y métodos. Las hDPSC serán subcultivadas y se inocularán los agentes dentales de interés en contacto directo o los extractos líquidos del material de las muestras (Flúor, cementos, adhesivos, resinas, etc.) a diferentes dosis. Se evaluará la curva dosis-respuesta, concentración citotóxica media (CC50) y viabilidad celular con el bioensayo de MTT. (Garcia-Contreras et. al., 2014a, 2014b, 2014c; Garcia-Contreras et. al., 2015; Young et. al., 2005). 6. Práctica 6: Fragmentación del DNA de hDPSC. Objetivo: Identificar la fragmentación del DNA de hDPSC cultivo con algún agente de uso en odontología mediante electroforesis. Materiales y métodos: Las hDPSC se pondrán en contacto con agentes dentales de interés a diferentes dosis. Las células se lisadas, RNasa A, proteinasa K y visualizadas RedSafe en una cámara de UV para observar los patrones de fragmentación, se utilizarán células HL-60 inducidas a apotosis como control positivo. 7. Práctica 7: Determinación del tipo de muerte celular de hDPSC. Objetivo: Determinar el tipo de muerte celular de hDPSC inducido por agentes de uso en odontología. Material y métodos: Las células hDPSC estarán en contacto con agentes de interés en odontología, las células serán inducidas a lisis, adición de caspasa-3 [DEVD-pNA (p-nitroanilina)], inihbidor de caspasa, inhibidor de autofagia: bafilimicina y 3-metiladenina y el cromóforo será analizado en espectrofotómetro (García-Contreras et. al. 2010a; 2010b). Durante el desarrollo del manual de prácticas se tomarán fotografías y videograbaciones que completarán gráficamente el manual. El manual contendrá los siguientes apartados: Carátula, índice, y para cada practica: objetivos, introducción, material y método, conclusión, relevancia científica, autoevaluación y bibliográfia. El manual contendrá protocolos estandarizados y reproducibles que describirán detalladamente los paso a realizar. Durante cada práctica, los alumnos adoptarán el procedimiento para resolver problemas experimentales inmediatos en las prácticas. Se solicitará el registro de derechos de autor y su publicación en versión digital para una mayor difusión entre la comunidad y universidades. |
| metadata.dc.description.goals: | METAS POR AÑO Implementar el uso del manual de del aislamiento, cultivo, subcultivo, caracterización y criopreservación de células madre mesenquimales de la pulpa dental humana (hDPSC) (PAPIME: PE201617). Describir las prácticas de laboratorio que se incluirán en el manual que incluirán: objetivos, introducción, material y método, conclusión, relevancia científica, autoevaluación y referencias bibliográficas. Las prácticas serán de uso para las asignaturas relacionadas a la Inmunología, Biología celular, molecular y tisular, células troncales, entre otras para estudiantes de pregrado y posgrado. El manual de prácticas se elaborará en formato electrónico que será complementado con el soporte de imágenes y videos representativos, como un complemento en el mejoramiento del proceso enseñanza-aprendizaje y tener una amplia difusión del mismo. Se impartirá capacitación de los usos del equipo, reactivos y materiales a alumnos y profesores de las diferentes áreas de la Licenciatura en Odontología, Ciencias Agrogenómicas, Optometría, Fisioterapia y de los programas de posgrado. Todos los resultados de cada práctica serán analizados por los estudiantes que realicen los experimentos para relacionarlos con el conocimiento teórico y vincularlo con las prácticas en el laboratorio que repercuta en la formación de aprendizaje mucho mas significativo. |
| metadata.dc.description.selfAssessment: | El desarrollo del manual comprometido en este proyecto se ha completado de forma satisfactoria y servirá como ayuda para mejorar la enseñanza de la asignatura de Biología Molecular, Celular y Tisular para las Licenciatura en Odontología, Ciencias Agrogenómicas, Optometría, Fisioterapia y de los programas de posgrado. El manual se compone de 7 prácticas: Práctica 1: Cultivo celular primario de hDPSC Práctica 2: Subcultivo celular o cultivo secundario de hDPSC Práctica 3: Observación celular de hDPSC Práctica 4: Interacción de las hDPSC y su ambiente Práctica 5: Respiración aeróbica de hDPSC Práctica 6: Fragmentación del DNA de hDPSC Práctica 7: Determinación del tipo de muerte celular de hDPSC Cada práctica contiene un objetivo, aprendizaje esperado, introducción de la práctica, listado de materiales, metodología paso a paso, resultados y conclusión, autoevaluación y referencias bibliográficas. Cada uno de los apartados se complementa de manera gráfica con imágenes, diagramas y gráficos de experimentos representativos para que el alumna tenga la guía y punto de comparación con lo desarrollado en las prácticas. El manual se centra en un prácticas innovadoras, reproducibles y estandarizadas que se completan con la experiencia de los autores en esta área con experimento innovadores y una potencial comprensión a nivel de ciencia básica y relevancia clínica al relacionar en cada una de las áreas. El manual se encuentra desarrollado lo que resta es enviar a un diseñador gráfico para poder plasmar un impacto visual mas atractivo para los usuarios, al termino de ello, se solicitara la protección de derechos de autor y su futura difusión dentro de la ENES Unidad León y otras instituciones que esten interesados en su utilización. El manual ha resultado atractivo para los estudiantes por el hecho de que alumnos de pregrado de primer año, e incluso alumnos de posgrado que nunca habían tenido la oportunidad de realizar prácticas con experimentos de vanguardia y el uso de células madre o células troncales que han y están revolucionando el área de la medicina regenerativa y bioingeniería de tejidos. |
| metadata.dc.description.goalsAchieved: | Se ha implementado del manual titulado: Aislamiento, cultivo, subcultivo, caracterización y criopreservación de células madre mesenquimales de la pulpa dental humana (hDPSC) (PAPIME: PE201617). El presente manual que de este proyecto incluye las practicas que lo conforman con los siguientes apartados: objetivo, aprendizajes esperados, introducción, material, metodología, resultados y conclusión, autoevaluación y referencias bibliográficas. Se ha dado capacitación sobre el uso del equipo, reactivos y materiales a alumnos y profesores de las diferentes áreas de la Licenciatura en Odontología, Ciencias Agrogenómicas, Optometría, Fisioterapia y de los programas de posgrado al mismo tiempo que el uso del manual a estudiantes de pregrado y posgrado. |
| metadata.dcterms.provenance: | Esc. Nal. de Estudios Superiores, Unidad León, Gto. |
| metadata.dc.subject.DGAPA: | Odontología |
| metadata.dc.type: | Proyecto PAPIME |
| Aparece en las colecciones: | 2. Área de las Ciencias Biológicas, Químicas y de la Salud |
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